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桑黄胞内多糖抗衰老作用的研究
郑媛，沈业寿
(安徽大学生命科学学院糖复合物与糖工程实验室，合肥230039)
中国食用菌2007年第三期
摘
要：
研究了桑黄胞内多糖(pHPS)对果蝇寿命的影响和对D-半乳糖致小鼠衰老模型的抗衰老作用。结果表明，PHPS能延长果蝇平均寿命和最长寿命。提高衰老小鼠血清、脑、肝组织中超氧化歧化酶(SOD)活性．降低小鼠血清、脑、肝组织中丙二醛(MDA】的含量，增加胸腺的重量和改善小鼠学习记忆行为。说明PHPS具有一定的抗衰老、抗氧化作用。
关键词：桑黄：多糖；寿命；抗衰老
桑黄(PheLLinus igniarius)属担子菌门。层菌纲，多孔菌目，多孔菌科的药用真菌．其药用最早记载于《本草纲目》中。桑黄，味微苦，能利五脏、软坚、排毒、止血、活血等多种功能【l】。桑黄的多种功能中特别是在抗癌方面的作用【2】，已经成为国内外研究热点．但未见桑黄抗衰老作用的相关报道。在《神农本草经》中有描述桑黄“久服轻身不老延年"【3】。为此，我们对桑黄胞内多糖进行了抗衰老作用的研究。
材料和仪器
1．1供试菌株桑黄菌4．2303．由安徽大学糖复合物与糖工程实验室提供。
1．2实验动物
昆明种小鼠20±2g，安徽省医学科学研究所提供(合格证为皖医动准第03号)，雌雄各半：黑腹果蝇，由安徽大学生命科学学院提供。
1．3试剂
D-半乳糖由上海试剂二厂生产：香菇多糖由武汉标达药业有限公司出品；MDA、SOD试剂盒均购自南京建成生物工程研究所：其它试剂均为分析纯试剂。
1．4仪器落地普通型大容量温度恒温培养振荡器．
上海智城分析仪器制造有限公司；净化工作台，蚌埠绝缘材料厂；循环水式真空泵，郑州长城科工贸有限公司；旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；冷冻干燥机，德国Chris公司；TL-16R台式高速冷冻离心机，上海市离心机械研究所；保温箱，天津市南郊区东泥沽实验仪器设备厂；Y型迷津，上海豪敦工贸有限公司制造；UV-9200紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器公司。
2．1桑黄胞内粗多糖的获得按本实验室先前报道过的方法制取【4】。
2．2果蝇寿命实验
2．2．1饲养果蝇的基本培养基配方：
①蔗糖26g，琼脂3g蒸馏水1
50ml，溶化；②玉米粉33g，酵母粉3g，蒸馏水150ml_。调成糊状；③将①加入②内，合并后加入2ml．丙酸。
2．2．2果蝇的培育和饲养：收集10h内羽化的果蝇成虫，乙醚麻醉，分组。第l组为正常组，饲养在基本培养基内：第2组为阳性对照组，饲养在含2％(W／W)香菇多糖(Lentinus
edodes polysaccharides,LEPS)的培养基内：第3～5组为不同剂量的给药组，分别饲养在含有2％、4％、8％PHPS的培养基内。雌、雄分管饲养，每组雌雄各100只，置于温度25℃，相对湿度60％～70％的培养箱中观察，每3d更换1次培养基，逐天统计果蝇的死亡数．直至果蝇全部死亡为止。计算每组平均寿命、半数存活期和最长寿命(每组最后死亡的10只果蝇存活天数的平均值)。
2．3小鼠抗衰老实验
2．3．1衰老模型的建立：颈背皮下注射D-半乳糖【5】。
2．3．2动物分组：昆明种小鼠60只．按体重随机分为6组，每组10只，即正常组、模型组、阳性对照组(LEPS
200mg／kg)、低中高剂量用药组(相当于PHPS100、200、400mg/kg)六个不同的实验组。
2．3．3动物处理：
除正常组外其余五组每天颈背皮下注射0．2mLD-半乳糖(120mg／kg)溶液一次，正常组每天注射等量生理盐水：同时，给药组每天用不同剂量的PHPS灌胃．阳性对照组用LEPS灌胃，正常组和模型组每天用等量的生理盐水灌胃，连续60d，每5d称1次体重。在30d时，训练小鼠走Y型迷津，一天1次连续7d．7d后测各组小鼠走迷宫所花时间。灌胃60d后对各组小鼠摘除眼球取血．随后用脱臼法处死小鼠并摘取胸腺和脾脏，并计算其重量(湿重)指数；同时摘取脑和肝组织测其SOD、MDA值。
2．3．4不同组织中SOD、MDA的测定：将摘除眼球取得的血在3
500rpm下离心10min制备血清，测定血清的SOD、MDA值。脑、肝组织用预冷生理盐水洗净．滤纸吸干、称重，制成10％的匀浆液，3
500rpm 离心，取上清测其SOD、MDA值。
2．4统计分析
采用spssl0．0统计软件进行数据分析．结果以x±s表示，组间差异用t检验进行显著性分析。
3结果
3．1对果蝇寿命的影响
实验结果表明：饲养在含4％PHPS培养基中的果蝇与正常组相比，平均寿命延长了27．5％，最长寿命延长了29．6％。在PHPS的低剂量组和中剂量组之间果蝇寿命随剂量的增大有延长的趋势．但高剂量组果蝇寿命并不是最长，而且死亡速度较快。结果见
表l。
3．2对小鼠学习记忆的影响
通常情况下，随着年龄增长，老年期的小鼠学习记忆功能呈下降趋势。通过在相同训练情况下对致衰老小鼠走Y型迷津所用时间的比较．模型组小鼠所花时间明显延长，学习记忆能力显著下降，而灌服PHPS的不同剂量组所花时间则短于模型组。结果见表2。
3．3对免疫器官重量的影响
于末次给药后24h．颈椎脱臼处死各实验组小鼠，并取其胸腺和脾脏，用滤纸吸干血液，在电子天平称重。按“胸腺或脾脏重／体重(mg／10g)”计算胸腺和脾脏指数。各组小鼠脾脏指数之间无统计学差异，各组小鼠的胸腺指数见表3。
3．4对小鼠血清、脑、肝组织中SOD、MDA的影响
于末次给药后24h．按试剂盒说明书分别测定各组小鼠血清、肝、脑SOD活性。结果发现长期给予D-半乳糖后．模型组小鼠各组织中的SOD活力显著低于正常组．而MDA含量显著提高。给药组小鼠各组织中SOD的活力比模型组显著提高．而MDA含量较模型组明显下降。结果见表4、表5。
4讨论
自由基学说认为自由基与衰老密切相关。随年龄的增长．人体内自由基水平呈增长趋势．同时自由基清除机制却呈退化趋势。结果造成体内自由基大量积聚。所以自由基对机体健康的危害作用渐趋严重．引发了机体多种生理功能的障碍．促进了多种老年疾病的发生、发展，导致机体的衰老，直至死亡。自由基是带有不成对电子的原子、分子离子或基团。性质非常活泼。体内抗自由基体系包括酶类和非酶类．例如属于酶类的有超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)等。当机体衰老或病理改变时．机体防御体系的抗氧化能力下降，体内自由基代谢产物(MDA)含量升高。实验结果表明PHPS能提高衰老小鼠血清、肝、脑组织中SOD活力．同时明显降低这些组织中MDA的含量。可见桑黄胞内多糖既能增加机体对自由基损伤的防御机能。又能减轻脂质过氧化物对组织或细胞的损伤．揭示PHPS可通过改善自由基代谢发挥抗衰老作用。
随着增龄，老年期的小鼠免疫功能呈下降趋势．机体免疫功能的提高将有助于延缓机体衰老过程和老年病的防治(6)。实验结果表明PHPS能明显促进小鼠胸腺重量增加，对脾脏和体重无明显影响．说明PHPS可能通过提高机体的免疫功能而延缓衰老过程。另外，PHPS还可延长果蝇的平均寿命和最长寿命。但对于高浓度PHPS加速果蝇死亡的原因有待于进一步研究。PHPS可能从多方面发挥抗衰老效应．因此，我们推测桑黄胞内多糖在抗衰老方面有着广泛的应用前景。
[参考文献]
【1】刘波著．中国药用真菌【M】．太原：山西人民出版社，
1974．71～73．
【2】郑立军，沈业寿等．药用真菌一桑黄的研究进展【J】．现代
中药研究与实践,2005，19(3)：61．
【3】温克，陈劲，李红等．桑黄等四种抗癌药物活性比较【J】．吉
林大学学报(医院版),2002,28(3)：247～249．
【4】张颖．沈业寿．液体发酵密环菌培养条件的优化及菌体多
糖的分离【J】．食用菌，200l，(2)：5～7．
【5】李文彬，韦丰，范明等．D-半乳糖在小鼠上诱导的拟老化
效应【J】．中国药理学与毒理学杂志，1995,9(2)：93—95．
【6】孔文娟，吕文伟，于晓凤等．北五味子粗多糖抗衰老作用
的实验研究【J】．中国老年学杂志,200l，21(6)：454～455． |
